电泳制胶操作步骤
电泳制胶操作步骤通常包括以下几个步骤:
根据所需琼脂糖凝胶的浓度称取琼脂糖粉末。
将琼脂糖粉末加入电泳缓冲液中,如TAE或TBE。
微波炉加热至琼脂糖完全融化,并确保溶液透明。
2. 浇注凝胶 :
将融化后的琼脂糖溶液冷却至约60-70°C。
如果需要,可以加入染料如Gelred以提高可视化效果。
将冷却的琼脂糖溶液倒入制胶模具中。
轻轻敲击模具以去除气泡。
3. 插入梳子 :
将梳子垂直插入模具中,梳齿与模具底部保留约1mm的间隙。
4. 灌注电泳槽 :
将模具放入电泳槽中,确保样品孔位于电场负极。
向电泳槽中加入电泳缓冲液,直至液面覆盖过胶面。
5. 静置凝固 :
室温下静置,直至琼脂糖凝胶完全凝固。
6. 拔出梳子 :
凝胶凝固后,小心拔出梳子。
7. 准备样品 :
将待检测样品与DNA loading buffer混合。
通常,样品需要变性处理,如加热煮沸。
8. 上样 :
使用微量移液器将样品小心加入凝胶的样品孔中。
9. 电泳 :
将电泳槽放入电泳仪中,并接通电源。
根据DNA片段大小选择合适的电压和电泳时间。
10. 观察结果 :
电泳结束后,取出凝胶,在紫外光下观察条带。
以上步骤是电泳制胶的基本流程,具体细节可能会根据实验要求和设备差异有所调整。请根据实验的具体需求进行操作
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